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荧光滤光片选择(荧光滤片参数)

来源:www.haichao.net  时间:2023-01-13 05:30   点击:99  编辑:admin   手机版

1. 荧光滤片参数

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2. 荧光滤片参数有哪些

1 )核 DNA 和线粒体 DNA

1. 当细胞培养到约 107 细胞 /ml 时,离心( 5 秒)收集细胞,再悬浮在 70 %乙醇中。

2. 固定 5 分钟或 5 分钟以上,用水洗 2 次。

3. 将细胞悬浮在含有 50ng/ml 的 4 , 6- 二脒基 -2 苯基吲哚的封固剂中。 1mg/ml 的 4 , 6- 二脒基 -2 苯基吲哚母液可在- 20 ℃下贮存。

4. 用紫外滤片观察。

2 )线粒体

1. 在生长培养基中培养细胞达到约 107 细胞 /ml 时,加入 100ng/ml 3 , 3’- 二已基噁羰花青碘化物( DiOC6 , Sigma D3652 或 Molecular Probes )用乙醇把 1mg/ml 母液稀释到 1/104 。

2. 培养 5 分钟或 5 分钟以上,用荧光素滤片观察。

3 )液泡

1. 当细胞生长到约 107 细胞 /ml 时,离心收集细胞( 5 秒),悬浮在含有 50mmol/L 柠檬酸钠( pH4.0 )的 YPD 中。

2. 加 CDCFDA (羧基 -2’,7’- 二氯 - 荧光素双乙酸盐)到终浓度为 10 μ mol/L 。

3. 保温10 分钟或 10 分钟以上,用荧光滤片观察。

4 )牙痕和几丁质

1. 用生长培养基培养细胞达 107 细胞 /ml 时,加 100 μ g/ml Calcofluor (荧光发光剂 28 ; Sigma F3543 )(用水将 1mg/ml 母液稀释到 1/10 ,母液可在- 20 ℃下黑暗保存数星期)。

2. 培养 5 分钟或 5 分钟以上,用水洗 2 次,用紫外滤片观察

3. 荧光滤片参数设置

荧光显微镜的滤光片种类有以下几种: 1. 吸热滤光片 吸热滤光片是防止光源光谱中的热辐射线损伤光具组所必需的滤光片。 2.激发光滤光片 激发光滤光片可以选择性吸收长波谱线而吸通透紫外线,紫色,蓝色和绿色光线的滤光片为激发滤色片 。3.阻挡滤光片 阻挡滤光片是选择性吸收短波谱线和红外线而通透较长波长可视线的滤光片,其功能是使观察都能看到被检物体所激发出来的荧光,同时保护观察都的角膜免遭紫外线伤害。 4.色光分离滤光片 色光分离滤光片是将激发光反射到被检物体上,使被检物体激发出荧光,再将荧光透射到目镜的滤光反射镜。这类滤我片只能用于落射光聚光器中,而透射光荧光显微镜不需要色光分离。 5.干涉滤光片 干涉滤光片是高性能激发滤光片的一种。它是将数张薄层金属膜叠放在抛光的两张玻璃片之间制成的滤光片。每张薄金属膜的折光系数都不相同,因此照明光源的各种不同波长的谱线在每张金属膜上反复进行反射,使得某些波长的谱线因相消干涉而抵消,另一些波长的谱线相加干涉而得以加强,并透射过去,这样得到透射波谱很窄、半波峰宽度只有6-20nm,透光度可达到60% -70%的滤光片。

4. 荧光滤片参数表

为什么会有内滤效应?内滤效应通常来自两个方面,第一种情况是物质对激发光的竞争吸附作用,这种竞争吸附作用,会减少有效实际作用于荧光物质的光强,导致物质的荧光实际强度下降;第二种情况,发射荧光强度的吸收,这种情况不仅会使荧光光谱的强度下降,而且会使光谱出现非三线性结构,也就是畸变的光谱区域[1]。

其实内滤效应,在测定的时候几乎很难避免,我们在测样品的时候一般采取的办法无非就是稀释样品,但是稀释样品同样又会导致信噪比(有效信号/干扰信号)下降,样品污染理化性质改变当然也有可能。再有就是通过数据方法的矫正,这么做也是可以,不过,好像效果也不是很好。

所以一般我们都要对样品进行一个稀释作用,毕竟朗伯-比尔定律告诉我们如果想研究光强和浓度的关系,必须让溶液溶度小于0.1mol/L

5. 滤光片指标

从复合光中分离出某一波段单色光的滤光片。只让光线中某一波段通过。越窄,透过的光线波段或颜色越纯,仪器的识别能力越强。窄带滤光片采用多层硬膜经离子辅助沉积纳米材料高真空蒸发而成,膜层致密性好,带宽窄、高截止率、高透光率。

光学指标:

中心波长:365nm±5nm

峰值透过:T>80%

带 宽:10~30nm

截止波段:200-345nm 385nm-700nm

截 止 率:T<0.1%

应用领域:

荧光分析仪、酶标仪、医疗设备、生化设备、医学与临床仪器仪表、分析仪器等。

6. 荧光滤光片

当你需要某个特征峰时可以使用滤光片。

7. 怎样选择滤光片和荧光滤光片

紫外光激发滤板:此滤板可使400nm以下的紫外光透过,阻挡400nm以上的可见光通过。常用型号为UG-1或UG-5,外加一块BG-38,以除去红色尾波。   紫外蓝光激发滤板:此滤板可使300~450nm范围内的光通过。常用型号为ZB-2或ZB-3,外加BG-38。   紫蓝光激发滤板:它可使350~490nm的光通过。常用型号为QB24(BG12)。

8. 荧光显微镜滤片

光学显微镜是利用光学原理,把人眼所不能分辨的微小物体放大成像,以供人们提取微细结构信息的光学仪器。

科研级显微镜是一种用于生物学、基础医学领域的分析仪器,于2018年09月07日启用。

主机:电动正置荧光显微镜(Axio Imager M2); 物镜倍数:5×、10×、20×、40×、100× 油镜; 荧光滤片:DAPI、GFP、Cy3; 软件:①体视学自动化分析软件;②神经描绘自动化分析软件;③汇入影像迭图模块 摄像头:①彩色摄像头(Qimaging 2000R);②单色摄像头(Hamamatsu Flash 4.0)。

9. 荧光分光光度计滤光片

光管与样品之间。

1、初级滤光片是将滤光片置于光管和样品间,其目的是为得到单色性更好的辐射和降低待分析元素谱感兴趣区内的由原级谱散射引起的背景。

 2、次级滤光片是将滤光片置于样品和探测器之间,主要是对试样中产生的多元素X射线荧光谱线进行能量选择,提高待测元素的测量精度。

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